來源：【中國醫(yī)藥報(bào)】

化妝品產(chǎn)業(yè)作為大健康產(chǎn)業(yè)的重要組成部分，其安全性（如過敏性、刺激性等）備受關(guān)注。目前，我國化妝品安全性評(píng)價(jià)方法以動(dòng)物試驗(yàn)為主，隨著動(dòng)物“3R”（替代、減少、優(yōu)化）原則被國際社會(huì)越來越廣泛認(rèn)可、化妝品動(dòng)物試驗(yàn)禁令的持續(xù)推行，同時(shí)在科技發(fā)展的驅(qū)動(dòng)下，動(dòng)物替代試驗(yàn)方法在化妝品安全性評(píng)價(jià)領(lǐng)域受到越來越多的關(guān)注。

替代方法研究取得積極成效

在以歐盟為代表的化學(xué)品和化妝品法規(guī)推動(dòng)下，動(dòng)物替代試驗(yàn)方法成為熱點(diǎn)研究領(lǐng)域，許多國家和地區(qū)均積極開發(fā)替代方法。同時(shí)，驗(yàn)證機(jī)構(gòu)、標(biāo)準(zhǔn)化組織和監(jiān)管機(jī)構(gòu)也加快了對(duì)替代方法的研究和認(rèn)可速度，近年來，除了經(jīng)濟(jì)合作與發(fā)展組織（OECD）驗(yàn)證認(rèn)可的替代方法外，還有很多新方法正處于開發(fā)階段或驗(yàn)證程序中。

我國在化妝品動(dòng)物替代試驗(yàn)方法標(biāo)準(zhǔn)認(rèn)可方面緊隨國際標(biāo)準(zhǔn)的發(fā)展趨勢。2016年，《化妝品用化學(xué)原料體外3T3中性紅攝取光毒性試驗(yàn)方法》被納入《化妝品安全技術(shù)規(guī)范》（2015年版）（以下簡稱《規(guī)范》）；2018年，中國食品藥品檢定研究院成立全國化妝品替代方法研究與驗(yàn)證工作組，并聯(lián)合多家權(quán)威機(jī)構(gòu)，進(jìn)一步加快研究及驗(yàn)證化妝品替代檢驗(yàn)方法。目前，被納入《規(guī)范》的動(dòng)物替代試驗(yàn)方法共7項(xiàng)，檢驗(yàn)范圍為化妝品用化學(xué)原料，與OECD測試指南一致；除2016年納入的方法標(biāo)準(zhǔn)外，還包括《化妝品用化學(xué)原料離體皮膚腐蝕性大鼠經(jīng)皮電阻試驗(yàn)方法》《化妝品用化學(xué)原料體外兔角膜上皮細(xì)胞短時(shí)暴露試驗(yàn)》《皮膚變態(tài)反應(yīng)：局部淋巴結(jié)試驗(yàn)：DA》《皮膚變態(tài)反應(yīng)：局部淋巴結(jié)試驗(yàn)：BrdUELISA》《化妝品用化學(xué)原料體外皮膚變態(tài)反應(yīng)：直接多肽反應(yīng)試驗(yàn)》和《體外哺乳動(dòng)物細(xì)胞微核試驗(yàn)》（詳見表1），有力推動(dòng)了毒理學(xué)動(dòng)物替代試驗(yàn)方法在我國化妝品安全性評(píng)價(jià)中的應(yīng)用。

除被納入《規(guī)范》的毒理學(xué)動(dòng)物替代試驗(yàn)方法相關(guān)標(biāo)準(zhǔn)外，還有化妝品體外安全性評(píng)價(jià)相關(guān)系列國家標(biāo)準(zhǔn)和行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)。據(jù)統(tǒng)計(jì)，共有相關(guān)標(biāo)準(zhǔn)22項(xiàng)，其中國家標(biāo)準(zhǔn)9項(xiàng)、行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)13項(xiàng)（詳見表2）。

研究仍面臨問題和挑戰(zhàn)

雖然國際上替代方法研究盛行，我國在該領(lǐng)域的研究也取得了積極進(jìn)展，但由于種種原因，我國替代方法的研究和應(yīng)用仍面臨很多挑戰(zhàn)，具體表現(xiàn)在以下幾方面。

缺乏跨部門的驗(yàn)證機(jī)構(gòu) 很多國家和地區(qū)均組建了化妝品替代方法研究機(jī)構(gòu)，如歐洲替代方法驗(yàn)證中心（ECVAM）、美國替代方法驗(yàn)證部門間協(xié)調(diào)委員會(huì)（ICCVAM）、歐洲動(dòng)物替代試驗(yàn)方法合作組織（EPAA）、日本替代方法驗(yàn)證中心（JaCVAM）、韓國替代方法驗(yàn)證中心（KoCVAM）、巴西替代方法驗(yàn)證中心（BraCVAM）等。這些機(jī)構(gòu)的設(shè)立對(duì)替代方法的開發(fā)、驗(yàn)證、認(rèn)可起到了積極的推動(dòng)作用，但我國尚未組建相關(guān)部門。

方法適用性待提升 在OECD測試指南中，替代方法可用于檢測單一的化學(xué)物質(zhì)或成分簡單的混合物。在歐盟化妝品風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估管理體系中，替代試驗(yàn)的檢測對(duì)象主要是化妝品原料，OECD測試指南可以滿足歐盟化妝品安全風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估的要求。在我國，特殊化妝品上市前需要對(duì)終產(chǎn)品進(jìn)行許可檢驗(yàn)，而目前驗(yàn)證的替代方法不適用于化妝品產(chǎn)品。此外，我國化妝品原料中很多是動(dòng)植物提取物，這類原料成分復(fù)雜、組分繁多，由這些原料混合成的化妝品產(chǎn)品形態(tài)復(fù)雜，不符合OECD指南中“化學(xué)物”的概念，無法用目前的替代方法為安全評(píng)估提供毒理學(xué)數(shù)據(jù)。因此，無論是基于我國化妝品法規(guī)對(duì)產(chǎn)品的檢測要求，還是基于我國化妝品原料的特點(diǎn)，國際上通行的替代方法在轉(zhuǎn)移至我國實(shí)際應(yīng)用過程中，都需要進(jìn)一步評(píng)估和確認(rèn)其是否可以預(yù)測化妝品配方及產(chǎn)品安全性。

需探索全身毒性評(píng)價(jià)的替代方法 在化妝品安全性評(píng)價(jià)中，替代方法多集中于局部毒性評(píng)價(jià)，包括皮膚刺激性/腐蝕性、眼刺激性/腐蝕性、皮膚光毒性、皮膚致敏性等方法，而在全身毒性方面（致癌性/致畸性/致突變性、胚胎毒性等）缺乏相應(yīng)替代方法。隨著生物材料、微流控、組織工程和生物傳感等技術(shù)的發(fā)展，器官芯片（OOC）在模擬人體不同組織器官主要空間結(jié)構(gòu)和功能特征方面展現(xiàn)出巨大潛力。器官芯片通過控制細(xì)胞在體外培養(yǎng)過程中的生物學(xué)行為，在芯片上再現(xiàn)器官功能。可利用器官芯片研究不同器官和不同細(xì)胞之間的交互作用，開展安全性系統(tǒng)評(píng)價(jià)。

此外，較前沿的皮膚吸收、內(nèi)分泌干擾等方面的替代方法研究在我國也相對(duì)較少。在組合策略方面，目前我國仍處于研究和建立單一方法的技術(shù)發(fā)展階段，未來，組合策略的研究應(yīng)用將成為重要課題。

三管齊下推進(jìn)研究應(yīng)用

我國在動(dòng)物替代試驗(yàn)技術(shù)研究和方法推行方面起步較晚，結(jié)合上述問題和挑戰(zhàn)，建議從三方面發(fā)力，進(jìn)一步推進(jìn)相關(guān)工作。

一是成立跨部門（如藥監(jiān)、環(huán)保、農(nóng)業(yè)等部門）、跨學(xué)科（如藥物毒理學(xué)、化妝品毒理學(xué)、化學(xué)品毒理學(xué)、農(nóng)藥毒理學(xué)）的聯(lián)合驗(yàn)證工作組，統(tǒng)籌協(xié)調(diào)相關(guān)研究工作。

二是在化妝品安全性評(píng)價(jià)策略及新方法的開發(fā)驗(yàn)證方面，加快體外重組3D模型的研究，加強(qiáng)替代方法的研究技術(shù)儲(chǔ)備，利用有害結(jié)局路徑（AOP）理念，建立適應(yīng)我國國情的替代方法；進(jìn)一步制定相應(yīng)技術(shù)指南，滿足化妝品安全性評(píng)價(jià)及風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估的要求。

三是器官芯片的構(gòu)建和應(yīng)用將是未來的發(fā)展方向，為全身毒性的體外評(píng)價(jià)提供新方案。建議加大力度推動(dòng)我國器官芯片科學(xué)研究和產(chǎn)業(yè)化進(jìn)展，使器官芯片這一新興生物芯片技術(shù)在化妝品全身毒性評(píng)價(jià)中得以有效應(yīng)用。

面向未來，隨著替代技術(shù)的日益成熟，我國化妝品安全性評(píng)價(jià)將逐步縮小與發(fā)達(dá)國家和地區(qū)的差距，替代方法的技術(shù)水平也會(huì)相應(yīng)提高，應(yīng)用范圍也將逐漸擴(kuò)大，并將逐步實(shí)現(xiàn)自主創(chuàng)新，形成中國特色。

（本文摘編自中國健康傳媒集團(tuán)、中國藥品監(jiān)督管理研究會(huì)編寫的《2021中國化妝品藍(lán)皮書》，作者為謝珍、桑晶、何立成、匡榮）

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替代方法發(fā)展呈現(xiàn)三大趨勢

近年來，化妝品動(dòng)物替代試驗(yàn)方法發(fā)展呈現(xiàn)三大趨勢。

一是有害結(jié)局路徑（AOP）應(yīng)用領(lǐng)域不斷涌現(xiàn)新成果和新方法。每個(gè)AOP代表關(guān)于分子起始事件、中間事件和個(gè)體或群體水平的有害結(jié)局之間的聯(lián)系。皮膚致敏的整合策略是成功應(yīng)用AOP概念進(jìn)行法規(guī)應(yīng)用的案例，OECD已建立了皮膚致敏AOP框架并于2016年通過。該AOP包括四個(gè)關(guān)鍵事件：分子起始事件是化學(xué)物質(zhì)（包括代謝物或非生物轉(zhuǎn)化產(chǎn)物）與皮膚蛋白親核性氨基酸殘基的共價(jià)結(jié)合，為分子水平的表達(dá)；角質(zhì)形成細(xì)胞的活化，為細(xì)胞水平的表達(dá)；樹突狀細(xì)胞（DC）的活化，為細(xì)胞水平的表達(dá)；T細(xì)胞活化和增殖，為組織器官層次的系統(tǒng)性表達(dá)。基于致敏產(chǎn)生機(jī)制，針對(duì)AOP順序鏈上的關(guān)鍵事件設(shè)計(jì)相對(duì)應(yīng)的致敏性檢測方法。2014年，OECD發(fā)布了AOPWiki，借助互聯(lián)網(wǎng)技術(shù)為AOP的開發(fā)提供高效共享、協(xié)調(diào)互補(bǔ)的平臺(tái)。AOPWiki發(fā)布的有害結(jié)局和提出的關(guān)鍵事件，可為替代方法的開發(fā)提供新思路。

二是整合測試與評(píng)估方法（IATA）的開發(fā)。鑒于單一替代方法的不足和局限性，應(yīng)合理、科學(xué)地組合使用單一方法，以獲得毒理學(xué)全面評(píng)估。組合模式可參考OECD發(fā)布的I ATA指南。該指南不僅考慮現(xiàn)行有效的方法，還加入計(jì)算機(jī)預(yù)測方法、化學(xué)結(jié)構(gòu)特征信息、人群暴露等。此外，對(duì)于復(fù)雜的毒性終點(diǎn)，也建議采用I ATA，以避免單一替代方法無法完整覆蓋AOP全過程的局限，如可根據(jù)各單一方法的檢驗(yàn)?zāi)芰Α㈧`敏度、局限性及使用條件等，將導(dǎo)致皮膚致敏發(fā)生的AOP不同階段的替代方法組合起來，設(shè)計(jì)組合策略，提高致敏性風(fēng)險(xiǎn)預(yù)測的準(zhǔn)確性。

三是安全評(píng)估推廣應(yīng)用。化妝品安全評(píng)估指利用已有的科學(xué)資料對(duì)化妝品中危害人體健康的已知或潛在的不良影響進(jìn)行科學(xué)評(píng)價(jià)，能有效反映化妝品的潛在風(fēng)險(xiǎn)，是化妝品安全性評(píng)價(jià)的重要技術(shù)手段之一。國際上，歐盟、美國、日本等國家和地區(qū)已普遍將安全評(píng)估手段用于化妝品監(jiān)管，建立了科學(xué)的評(píng)估工作程序，發(fā)布了指導(dǎo)性文件。近年來，化妝品安全評(píng)估理念在我國被廣泛普及和應(yīng)用。2010年，原國家食品藥品監(jiān)督管理局將安全風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估概念引入對(duì)化妝品內(nèi)可能存在的安全風(fēng)險(xiǎn)物質(zhì)的管理中，標(biāo)志著安全風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估成為我國化妝品監(jiān)管的科學(xué)方法之一。同年，原國家食品藥品監(jiān)督管理局印發(fā)《化妝品中可能存在的安全性風(fēng)險(xiǎn)物質(zhì)風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估指南》，明確化妝品中可能存在的安全性風(fēng)險(xiǎn)物質(zhì)的風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估程序。2013年，原國家食品藥品監(jiān)督管理總局印發(fā)《國產(chǎn)非特殊用途化妝品備案要求》，明確“國產(chǎn)非特殊用途化妝品風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估結(jié)果能夠充分確認(rèn)產(chǎn)品安全性的，可免予產(chǎn)品的相關(guān)毒理學(xué)試驗(yàn)”。這既有助于確保化妝品安全，又能有效減少毒理學(xué)檢測的安全風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估方法的使用。2020年，《化妝品監(jiān)督管理?xiàng)l例》出臺(tái)，規(guī)定化妝品新原料和化妝品注冊(cè)、備案前，注冊(cè)申請(qǐng)人、備案人應(yīng)當(dāng)自行或者委托專業(yè)機(jī)構(gòu)開展安全評(píng)估。2021年5月1日，《化妝品安全評(píng)估技術(shù)導(dǎo)則（2021年版）》正式施行，旨在規(guī)范和指導(dǎo)我國化妝品安全評(píng)估工作。

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